Purifier des protéines : principes et application aux conjugués Présentiel

PARTIE THÉORIQUE (2 jours) :

Introduction à la purification des protéines

Objectifs de la purification de protéines

Procédé standard de purification de protéines

Techniques utilisées pour la séparation et le changement de conditions physico-chimiques dans le cadre de la purification de protéines

PARTIE 1/ Structure, propriétés et stabilité des protéines

Structure des protéines

Propriétés physico-chimiques des protéines

Stabilité des protéines (et précautions de manipulation)

Zoom sur les anticorps conjugués

PARTIE 2/ Technique de séparation des protéines : la chromatographie

Principes de base en chromatographie

Équipement et supports de chromatographie (phase stationnaire solide)

Tampons (phase mobile liquide)

Techniques de chromatographie : principes et paramètres clés (débit, géométrie de colonne, capacité de chargement, gradient…) pour les chromatographies d'affinité, d'échange d'ions, d'interactions hydrophobes et de filtration sur gel (= exclusion stérique)

PARTIE 3/ Développement d'un procédé de purification de protéines  

Stratégies

Développement et optimisation d'un procédé de purification (étapes, paramètres d'évaluation : rendement et pureté)

Zoom sur la purification d'anticorps conjugués : exemple(s) de procédés internes SANOFI (sous couvert d'un accord de confidentialité et sous réserve de disposer des informations)

PARTIE 4/ Mise en pratique

Mise en place de la stratégie de purification d'un anticorps d'intérêt : étapes, colonnes, tampons, débit, concentration de l'échantillon à purifier…

PARTIE PRATIQUE (2 jours) :

Introduction à l'utilisation d'un automate de chromatographie (système GE Healthcare ÄKTA™, logiciel UnicornTM)

Purification d'un anticorps à partir d'un mélange complexe par 2 techniques de chromatographie différentes au minimum (échange d'ions, interactions hydrophobes et/ou mixed-mode).

Analyse de la purification par HPLC SEC-MALS

Optimisation de la purification

Objectif général : développer les compétences de collaborateurs de profils chimistes en purification de protéines, dans le cadre de stratégies de conjugaison à des molécules synthétiques.

À l'issue de la formation, les participants seront capables de :

" définir les propriétés physico-chimiques des protéines utilisées dans le processus de purification (masse moléculaire, point isoélectrique, hydrophobicité, affinité)

" identifier les techniques de chromatographie adaptées à la purification d'une protéine d'intérêt

" développer et évaluer un procédé de purification de protéines par chromatographie, en théorie et en pratique (étapes clés, paramètres du procédé…)

" utiliser un appareil de chromatographie de type GE Healthcare ÄKTATM et le logiciel associé UnicornTM (pour les participants à la partie pratique de la formation)

Formation en présentiel, interactive et participative, avec utilisation de supports variés (exposés oraux, vidéos, études de cas, outils numériques), mise en pratique en laboratoire et utilisation d'exemples concrets liés à l'activité des participants, sous réserve de disposer des informations.

Supports de formation au format pdf pour la partie théorique et imprimés pour la partie pratique.